CUESTIONARIO DE MICROBIOLOGIA

Centro de Estudios Tecnológicos del Mar en Ensenada, Prof. José Luis Peña Manjarrez
Laboratorista Ambiental. Tercer Semestre. Análisis Biológicos del Agua. Tema 1.
Microbiología. Cuestionario 1.
Tema 1: Generalidades y Desarrollo Histórico de la Microbiología

1.- ¿Cuál de los siguientes hechos no formó parte de la controversia sobre la generación espontánea o abiogénesis?
a) Los hallazgos de Spallanzani (1769) sobre el calentamiento de infusiones en envases cerrados impedía la generación espontánea.
b) La teoría microbiana de las enfermedades expuesta por Koch en 1876.
c) Los experimentos de Pasteur en 1861 sobre infecciones estériles, microorganismos del aire y frascos con cuello de cisne.
d) Las observaciones de Redi (1665) sobre el crecimiento de gusanos en la carne en putrefacción.
e) La esterilización del aire llevada a cabo por Schwann en 1837 como comprobación de ser la causa de contaminación de las infusiones estériles.

2.- Tuvieron un papel destacado en el desarrollo de la teoría microbiana de las enfermedades:
a) Pasteur con la demostración de que un protozoo era la causa de una enfermedad en los gusanos de seda.
b) Walter Reed con la demostración de transmisión por vectores de la fiebre amarilla.
c) Koch demostrando que la causa del carbunco era una bacteria.

3.- Escribe brevemente los postulados de Koch sobre las enfermedades infecciosas bacterianas:

El agente patógeno debe estar presente en los individuos enfermos
•El microorganismo debe poder aislarse del huésped enfermo en cultivo puro
•El microorganismo crecido en cultivo puro, al inocularse en animales sanos, induce en ellos la enfermedad
•De estos animales experimentales inoculados y ya enfermos, se puede volver a aislar el microorganismo


4.- Pueden ser considerados como microorganismos acelulares:
a) Los virus filtrables (Ivanowsky 1892)
b) Los viroides (1967)
c) Los priones(1981).

5.- La clasificación de organismos consta de tres Imperios: Archea, Bacteria y Eucaria. ¿Qué agrupaciones o reinos se incluyen dentro del imperio Archea?:
a) Metanógenas, Halófilas extremas y Termófilas
b) Bacteria y Cianobacterias
c) Hongos
d) Archezoa
e) Cromista

6.- En la práctica y desarrollo de la antisepsis fue personaje histórico:
a) Semmelweis (1843) introduciendo el Cloro en el lavado de manos
b) Lister (1864) utilizando fenol para desinfectar habitaciónes
c) Pasteur (1885) introduciendo la vacuna de la rabia.

7.- Señale cuales de los siguientes son postulados de Koch sobre las enfermedades infecciosas bacterianas:
a) El microorganismo productor tiene que estar en todos los enfermos y no en los sanos
b) El microorganismo tiene que cultivarse en el laboratorio en cultivo puro.
c) El microorganismo tiene que poderse ver al microscopio en fresco o teñido.
d) Mediante la inoculación de los microorganismos tiene que producirse experimentalmente la enfermedad en los animales de laboratorio
e) En los animales con la enfermedad experimental hay que aislar el microorganismo causal.

8.- ¿Cuál de los siguientes microorganismos posee naturaleza celular?
a) Viroides b) Arqueobacterias c) Priones d) Virus e) Ninguno de los anteriores
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Laboratorista Ambiental. Tercer Semestre. Análisis Biológicos del Agua. Tema 1.
Microbiología. Cuestionario 1.

9.- ¿Cuál de las siguientes secuencias es la correcta?
a) Reino, Variedad, Orden, Género, Especie
b) Especie, Familia, Clase, Tribu, Reino
c) Familia, Orden, Clase, División, Reino
d) Reino, Clase, Familia, Especie, División
e) Subfamilia, Género, Subespecie, Subdivisión, Biovar

10.-¿Cuál de los siguientes acontecimientos relacionados con la Microbiología ha tenido lugar en época más reciente?
a) La teoría de la generación espontánea
b) El descubrimiento de los virus
c) El descubrimiento del microscopio electrónico
d) La aplicación de la taxonomía numérica
e) La erradicación de la viruela

Tema 2- Observación de los microorganismos: el microscopio, preparación y examen de muestras.
1.- El límite de resolución de un microscopio:
a) Disminuye al aumentar la longitud de onda de la fuente de iluminación
b) Aumenta al disminuir la apertura numérica del objetivo
c) Aumenta al aumentar el índice de refracción del medio
d) Aumenta al aumentar el ángulo de la luz que entra en el objetivo

2.- El límite de resolución de un microscopio:
a) Es inversamente proporcional al poder de resolución
b) Es inversamente proporcional a la apertura numérica del objetivo
c) Es directamente proporcional al índice de refracción del medio.

3.- Las técnicas de tinción en microscopía:
a) Aumentan el límite de resolución
b) Aumentan el contraste
c) Aumentan la apertura numérica
d) Evitan las aberraciones esféricas
e) Evitan las aberraciones cromosómicas

4.- Que tinción realizarías para comprobar la existencia de bacilos tuberculosos en el esputo de un paciente?:
a) Tinción de esporas
b) Tinción de Gram
c) Tinción de Ziehl-Nielsen
d) Tinción de corpúsculos metacromáticos

5.- ¿Qué tipo de microscopio posee mayor poder de resolución?
e) Contraste de fases b) Fluorescencia c) Barrido d) De luz ultravioleta e) Óptico

6.- Las bacterias Gram negativas:
a) Se decoloran por alcohol-acetona
b) La coloración final de Gram es rojo
c) El espesor del peptidoglicano es menor (2nm) que en las Gram + (10-20nm)
d) Presentan una membrana externa con lípidos

7.- ¿Cual es el principal motivo por el que usarías un microscopio de fluorescencia?:
a) Para observar células en movimiento
b) Para observar virus
c) Para observar estructuras bacterianas
d) Para apreciar la forma de un microorganismo "in vivo"
e) Para realizar diagnóstico en clínica
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8.- Después de añadir el alcohol (como decolorante) en la tinción de Gram, las células se verían:
a) Rojas las Gram negativas y azules las Gram positivas
b) Azules las Gram negativas y rojas las Gram positivas
c) Azules las Gram negativas y positivas
d) Incoloras las Gram negativas y azules las Gram positivas
e) Azules las Gram negativas e incoloras las Gram positivas

9.- En el microscopio electrónico de barrido:
a) Los virus no pueden verse debido a su pequeño tamaño
b) Se pueden observar microorganismos vivos
c) Los microorganismos se observan en tres dimensiones.

10.- En el microscopio electrónico de transmisión:
a) Los virus sí pueden verse a pesar de su pequeño tamaño
b) No se pueden observar microorganismos vivos
c) Los microorganismos se observan en tres dimensiones.

11.- Mediante el empleo del aceite de inmersión en un microscopio óptico, conseguimos:
a) Disminuir la apertura numérica del objetivo
b) Aumentar el límite de resolución del microscopio
c) Aumentar el poder de resolución del microscopio
d) Aumentar el contraste
e) Ninguna de las anteriores

Tema 3: La célula Procariótica; Estructura y Función
1.- La cápsula de la célula procariota;
a) es constante b) tiene un grosor inferior a 0.1 μm c) confiere protección ante la fagocitosis d) se tiñe con los colorantes habituales

2.- Son funciones del nucleoide:
a) La replicación del ADN y la segregación del cromosoma b) La transcripción
c) La regulación e intervención en la traducción y en la transferencia genética.

3.- Son funciones de la membrana citoplasmática:
a) Actuar como biomembranas: transporte, barrera osmótica
b) Suplir la carencia de estructuras especializadas en reacciones energéticas
c) Secreción (descarga de desechos y productos)
d) Síntesis de estructuras y moléculas externas
e) Conferir rigidez a la bacteria .

4.- Los ribosomas bacterianos:
a) Son numerosos (18.000 por célula)
b) Tienen una composición de RNAr 60% y proteínas 40 %
c) Tienen unasubunidad grande de 70 S con 34 proteínas y RNA de 23 S.

5.- Los plásmidos:
a) Son ADN extracromosómico
b) De 100 a 1000 veces menor que el cromosoma con extremos engarzados (circular)
c) Confierenrasgos o características y no son necesarios para la supervivencia.

6.- Los cocos en cadena se denominan: a) Micrococos b) Sarcinas c)Estafilococos d) Estreptococos e) Diplococos.

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7.- Las bacterias con una morfología en forma de coma reciben el nombre de:
a) Cocos b) Bacilos c) Espirilos d) Vibrios e)Sarcinas

8.- La pared celular de las bacterias:
a) Es una estructura relativamente rígida debido al peptidoglicano
b) Es la envoltura más interna de la célula
c) Da forma a las bacterias y la protege de los cambios de presión.

9.- La composición y estructura del DNA en los procariotas es como en los eucariotas:
a) Se ajusta al modelo de Watson y Crick con una doble hélice de 20 nm
b) Tiene como residuos ácido fosfórico, pentosas, bases púricas (A, G) y bases pirimídicas (C, T)
c) Está distribuido en varios segmentos en lugar de una molécula única circular.

10.- El mesosoma:
a) Son formaciones membranosas y tubulares
b) Son más frecuentes en G + 4
c) Aumenta la superficie y la función de membrana así como la secreción de enzimas (penicilinasas)
d) Interviene en la división celular, replicación DNA y la unión al material nuclear.

11.- El citoplasma soluble:
a) Es una solución gelatinosa, densa
b) Tiene un alto contenido en agua (70 - 80 %)
c) No contiene moléculas disueltas (azúcares, aminoácidos, sales, etc).

12.-¿Cuál de las siguientes son funciones de la pared celular de los procariotas?:
a) Conferir rigidez a la célula
b) Suministrar energía para el transporte activo por fosforilación oxidativa
c) Ser el punto de anclaje de bacteriófagos

13.- ¿Cuál de la siguiente no es una función de la membrana citoplasmática de las bacterias?
a) suministrar la energía para el transporte activo por fosforilización oxidativa
b) suministrar rigidez ala célula
c) ser una barrera osmótica
d) sintetizar o participar en la síntesis de la pared y de la cápsula
e) el formar mesosomas septales y laterales (función secretora).

14.- ¿Cuál de las siguientes no es una denominación para el núcleo de las bacterias?
a) Equivalente nuclear b) cromosoma bacteriano c) nucleoplasma d) nucléolo e) nucleoide

15.- ¿Cuál de las siguientes no es una estructura de la espora bacteriana?
a) nucleoplasma excéntrico b) citoplasma duro y granuloso c) aparato de Golgi
d) cortex con peptidoglicano e) exina con queratina

MICROASCOPIO LEEUWENHOEK

Microscopio LEEUWENHOEK

Anton van Leeuwenhoek, utilizando microscopios simples de fabricación propia, describió por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glóbulos rojos. El microscopista Leeuwenhoek, sin ninguna preparación científica, puede considerarse el fundador de la bacteriología. Tallaba él mismo sus lupas sobre pequeñas esferas de cristal, cuyos diámetros no alcanzaban el milímetro (su campo de visión era muy limitado, de décimas de milímetro). Con estas pequeñas distancias focales alcanzaba los 275 aumentos. Observó los glóbulos de la sangre, las bacterias y los protozoos; examinó por primera vez los glóbulos rojos y descubrió que el semen contiene espermatozoides. Durante su vida no reveló sus métodos secretos y a su muerte, en 1723, 26 de sus aparatos fueron cedidos a la Royal Society de Londres.microscopio de luz, (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de campo claro el desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek. Los microscopios de Leeuwenhoek constaban de una única lente pequeña y convexa, montada sobre una plancha, con un mecanismo para sujetar el material que se iba a examinar (la muestra o espécimen). Este uso de una única lente convexa se conoce como microscopio simple, en el que se incluye la lupa, entre otros aparatos ópticos.                                                                                   

PRACTICA 1 MICROSCOPIA

Practica 1 

Microscopia

Introducción  el propósito de esta práctica es conocer los posibles usos del microscopio para poder realizar estudios que requieran la observación de microorganismos para así poder identificarlos.  

Objetivos el objetivo principal es conocer el funcionamiento de los diferentes compuestos de los microscopios ya sea de un microscopio compuesto o uno invertido con ello realizar los procedimientos correspondientes en óptimas condiciones y correctamente para obtener resultados  viables.

 Fueron 2 tipos de microscopios los que estudiamos, el microscopio compuesto y el microscopio invertido presentare los componentes de cada uno. 

PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO

Sistema óptico

OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.

OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de esta

CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación. 

DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Sistema mecánico

SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.

PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.

CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular.

REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos.

TORNILLOS DE ENFOQUE: Macro métrico que aproxima el enfoque y micrométrico que consigue el enfoque correcto.

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente.      

 Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones.

 2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.

 3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x  o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.

Para realizar el enfoque:

a.       Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macro métrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.

b.      Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macro métrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.

·  Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. 

El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.

  Empleo del objetivo de inmersión:

 Bajar totalmente la platina.

Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se  va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.

Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40.

1)      Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.  Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.

2)      Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.

3)      Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.

4)      Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.

5)      Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.

6)      Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio

Microscopio invertido

    Como su nombre indica un microscopio invertido tiene una disposición inversa de sus componentes respecto a un microscopio convencional. La fuente de luz y el condensador están sobre la plataforma apuntando hacia abajo. Los objetivos están debajo de la plataforma apuntando hacia arriba. Los únicos componentes que están en la misma posición son los oculares, así mismo la muestra es colocada sobre la platina mecánica. 

                                                                                      

El microscopio invertido permite observar organismos o tejidos en cultivo sin una preparación previa, favoreciendo el seguimiento del estado de crecimiento, comportamiento y demás parámetros involucrados en el desarrollo del cultivo.
La observación se realiza a través de las bases de diferentes recipientes con espesores y características ópticas variables. 

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.

·         Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.

·         Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.

·         No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio

·         No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico platina,     revólver y condensador).

·         El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.

·         Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.

Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.